Unidad de Citometría de Flujo

Laboratorio de Citometría de Flujo

Citómetro FC 500 MPL Citómetro FC 500 MPL

La Citometría de Flujo (CMF) es una técnica de análisis celular multiparamétrico que se basa en el paso de una suspensión de partículas (generalmente células) alineadas por delante de un haz láser focalizado.

Principios de la Técnica

 La interacción del haz láser con las células da lugar a señales que corresponden a diferentes parámetros de la célula y que son recogidos por distintos detectores. Para la realización de las medidas, las células pueden estar vivas o fijadas pero, obligadamente, en suspensión celular y en forma de célula única. En la interacción con un haz láser mediante un flujo continuo, cada célula emite luz fluorescente como consecuencia de la excitación a la que es sometida. Los citómetros de flujo están formados por complejos sistemas fluídicos, ópticos, detectores electrónicos, convertidores analógico-digitales y digitales, y ordenadores.

  • El sistema fluídico permite un enfoque hidrodinámico del flujo celular hasta conseguir el alineamiento de las partículas o células con el láser.
  • Los sistemas ópticos permiten el enfoque del haz láser con un diámetro reducido para lograr el impacto sobre el menor número de partículas posibles simultáneamente. Otro sistema óptico se encarga de dirigir las señales producidas hacia los detectores adecuados.
  • El sistema electrónico se encarga de la cuantificación de los destellos de fluorescencia y de la luz dispersada transformándolas en datos para su procesamiento digital.
Aplicaciones

Las aplicaciones fundamentales de esta técnica se dan en biología molecular y celular y medicina y son la identificación de antígenos celulares mediante técnicas de inmunofluorescencia y el estudio del contenido de ADN y fases del ciclo celular
La Citometría de flujo se utiliza en biomedicina en los siguientes campos:

- En hematología: contaje celular, fórmula leucocitaria, contaje reticulocitario, análisis de médula ósea.

- En industria farmacéutica y farmacología: estudios de cinética celular.

- En inmunología: Determinación de subpoblaciones linfocitarias, inmunofenotipificación de leucemias y linfomas.

- En oncología: diagnóstico/pronóstico, monitorizar tratamiento.

- En microbiología: diagnóstico bacteriano y vírico, sensibilidad a antibióticos.

- En genética: cariotipo, diagnóstico de portador, diagnóstico prenatal.

En biología celular, la citometría de flujo permite estudiar numerosos parámetros celulares tales como la viabilidad, el metabolismo celular, algunas enzimas, la función mitocondrial y por supuesto expresión protéica y de receptores. Consiguiendo así una caracterización celular amplia en casi cualquier tipo de cultivo celular. El gran número de células analizadas en citometría de flujo en relativamente poco tiempo, permite la obtención de gran cantidad de datos estadísticos que pueden ser usados en gran variedad de estudios y ensayos clínicos.
La Citometría de Flujo tiene varias aplicaciones dentro de otros campos, incluyendo, la biología vegetal y biología marina, en microbiología de los alimentos e incluso en agricultura (estudios de ploidia) y veterinaria (reproducción animal).
También es útil en el estudio de la ecología microbiana, muy importante en estudios medioambientales, a través del seguimiento y la identificación de microrganismos acuáticos y de ambientes extremos.
El tipo de muestras que se pueden analizar en citometría de flujo es muy variado y va desde cultivos celulares, células sanguíneas, células vegetales, e incluso en células extraídas de órganos. Los únicos requisitos serían conseguir una suspensión celular y que el tamaño de cada partícula esté en un rango aproximado de entre 0,5 y 40 µm de Diámetro.
Además existe un tipo especial de citómetros denominados sorter que además de analizar, consiguen separar físicamente las células de interés (positivas para GFP o para cualquier otro parámetro) y recogerlas en tubos específicos o sobre placas en condiciones de esterilidad, permitiendo incluso su posterior cultivo. 

Tipo ensayo

FACSVantage SE (sorter):

  • Inmunofenotipajes celulares: hasta 5 anticuerpos y viabilidad.
  • Ciclo Celular en células fijadas o vivas, con Yoduro de Propidio, DAPI o Hoechst 33258/42.
  • Estudios cinéticos de funcionalidad celular.
  • Análisis Multiparamétricos funcionales y de expresión génica (GFP o antígenos de superficie).
  • Separaciones celulares de alta velocidad con la posibilidad de usar cualquiera de los 16 modos de separación (< Enriquecimiento, > Pureza) y en condiciones de esterilidad. La separación es posible en diversos tipos celulares como células en suspensión, células adherentes, e incluso bacterias o algas.
  • Separación de células sobre cualquier tipo de soporte (portas, placas petri, placas 6, 12, 24, 48, 96 pocillos) incluyendo el clonaje de una única célula.
  • Estudios de Micropartículas (0.5, 0.9 µm).

Cytomics FC 500 MPL (Citómetro analizador):

  • Inmunofenotipajes celulares: hasta 5 anticuerpos.
  • Ciclo celular con Yoduro de Propidio.
  • Estudios cinéticos de funcionalidad celular.
  • Estudios de proliferación con CFSE.
  • Contaje de bacterias, cianobacterias, etc.
  • Análisis Multiparamétricos funcionales y de expresión génica (GFP o antígenos de superficie).
  • Estrés oxidativo: DCFH, mitosox, etc.

 

Funcionamiento del Servicio


•Es IMPRESCINDIBLE contactar previamente con el Servicio de Citometría para planificar el experimento de Sorting a través del teléfono 914973128 o por la dirección de correo electrónico citometria.sidi@uam.es Para hacer una reserva de horas habrá que hacer una solicitud de ensayo previamente. La página para realizar la solicitud se encuentra disponible en la página web del SIdI:
http://www.uam.es/investigacion/servicios/sidi/especifica/sidiprincipal.html
•El número asignado a esta solicitud de ensayo es necesario para poder realizar la reserva en un turno concreto. Si no se realiza la solicitud de ensayo NO se podrá reservar en el servicio de citometría.
•Al realizar la solicitud de ensayo no olvide LEER las Normas de Funcionamiento del Servicio.
•El laboratorio funciona bajo el sistema de gestión de calidad ISO9001.
•Si es necesario asesoramos en el diseño de experimentos para citometría e interpretación de resultados.